Приложение Онкофорум.ру для iOS и Android

Русский онкологический форум теперь в вашем телефоне!

Получите ссылку на скачивание приложения

Укажите адрес электронной почты

Ссылка для скачивания отправлена

×
  • 18 февраля, 11:49
  • 1493
  • 0

Фракционирование крови

Фракционирование крови

Первый проект по получению белков - использование плазмы для фракционирования, был начат во время второй мировой войны и получил название – метод Кона. Процесс фракционирования и промышленного получения ценных белков был начат 55 лет назад. Плазма обрабатывалась этанолом, затем был разработан способ ее разделения с помощью низких температур. Позднее был применен хроматографический метод.

Плазма для фракционирования - сложная смесь ценных белков. Плазма для фракционирования состоит из прозрачной плазмы и красной фазы. Около 40% от общего объема крови составляет красная фаза, которую отделяют специальным методом в центрифуге. После экстракции и шоковой заморозки получается плазма для фракционирования. Из нее добывается ценный белок, который составляет всего лишь 5% плазмы, остальное – это электролиты и вода.

Фракционирование крови

Это разделение плазмы крови на группы – компоненты осаждения и хроматографические компоненты. К компонентам крови относятся: трансфузионные среды с признаками донора (резус-фактор, группа крови). Это эритросодержащие смеси, свежезамороженная плазма крови, тромбоцитарные и другие смеси. Препаратами крови являются: трансфузионные среды без признаков донора (только номер серии) - растворы протеина, иммуноглобулина, альбумина и других препаратов.

Эритросодержащие смеси: ЭМ (эритроцитарная масса); эритроконцентрат; эритроцитарная масса, обедненная лейкоцитами и тромбоцитами (ЭМОЛТ); отмытые эритроциты; эритроцитарная взвесь; отмытые размороженные эритроциты.

Отмытая эритромасса – к эритроцитарной массе добавляют физиологический раствор, затем раствор центрифугируют, удаляя надосадочную жидкость. Это позволяет получить высокую степень очистки от тромбоцитов, лейкоцитов, белков, продуктов распада. Такая очистка проводится несколько раз, иногда до 5. Отмытые эритроциты показаны больным с почечной и печеночной недостаточностью, пациентам с трансфузионной, аллергической реакцией. Вероятность аллергической реакции повышается при переливании компонентов крови, особенно у пациентов, в анамнезе которых есть аллергия.

Отмытые размороженные эритроциты (криоконсервированные) – хранятся в специальных условиях, могут находится в заморозке 8 лет. Сразу после размораживания эритроцитов они должны быть применены в течение суток.

ЭМОЛТ, эритроцитарная масса, обедненная лейкоцитами и тромбоцитами – с помощью специальных фильтров или центрифугирования отделяют тромбоциты и лейкоциты от эритроцитов. При применении ЭМОЛТ редко бывают фебрильные негемолитические реакции, снижается вероятность заражения цитомегаловирусом и ВИЧ.

ЭМ (эритроцитарная смесь) – содержит меньше цитрата, белковых антигенов, антител, продуктов распада клеток. Недостаток смеси – разрушенные тромбоциты и лейкоциты, которые могут вызвать фебрильную негемолитическую трансфузионную реакцию.

Тромбоцитарный концентрат -  применяют для лечения тромбоцитопенического геморрагического синдрома. Тромбоцитарный концентрат нестоек, кровяные пластинки обладают выраженными адгезионными свойствами. После переливания восстановление свойств тромбоцитов происходит через несколько часов. Хранится тромбоцитарный концентрат в устройстве – тромбомиксере. В нем поддерживается постоянная температура, концентрат постоянно помешивается.

Лиофилизированная плазма (сухая) – хранится долгое время, используется в качестве запаса на время чрезвычайной ситуации. Сухую плазму перед применением растворяют в изотоническом растворе хлорида натрия или глюкозы. Во время процесса консервирования происходит частичная потеря белка, который повреждается, в результате сухая плазма может вызвать анафилактическую или аллергическую реакцию. Из-за сложности технологии было сокращено производство лиофилизированной плазмы.

Концентрат лейкоцитов - в этом случае используют не все лейкоциты, а только гранулоциты. Получают от одного донора, после введения ему глюкокортикоидных гормонов, путем аппаратного гранулоцитофереза. Различные виды осложнений может вызвать переливание концентрата лейкоцитов – трансфузионные осложнения, реакции гемолитического типа. Переливание концентрата лейкоцитов рекомендуется при глубоком агранулоцитозе, если есть сопутствующая инфекция, плохо поддающаяся лечению антибиотиками.

СЗП (свежезамороженная плазма) – все биологические функции сохранены, высокие качества ей придает антигемофильный глобулин. Очень часто свежезамороженную плазму называют «антигемофильная плазма». Сразу после сбора крови (от 2 до 6 часов) плазму замораживают. Размораживание плазмы проводят в воде, контролируя температуру термометром.

Криопреципитат – концентрат, содержащий антигемофильный глобулин, некоторые факторы свертывания, фибриноген. Применяют концентрат для лечения гемофилии (А), острого ДВС синдрома (в стадии гипокоагуляции с гипофибриногенемией), болезни Виллебранда.

Фракционирование белка

Плазма для фракционирования содержит 7% белков организма. Лечебной силой обладают 27 белков, наиболее известные – это иммуноглобулин, фибриноген, альбумин. Белки входят в перечень лекарственных средств (19 из идентифицированных на сегодня). Плазма для фракционирования содержит белки, которые синтезируются печенью, В-лимфоцитами, эндокринными железами и клетками почек. Почти все белки плазмы являются гликопротеинами, кроме альбумина. Белки плазмы крови играют важную роль в гемодинамике кровеносной системы, определяют вязкость крови, поддерживают определенную кислотность крови. Белки плазмы крови – это резерв аминокислот для организма человека, важнейшее вещество для создания иммунитета, транспортных связей в организме:

  • Альбумин – участвует в связывании и транспортировке жирных кислот, билирубина, альдостерона, поддерживает коллоидно-осмотическое давление.

  • Глобулины – антитела, противопаразитарный иммунитет, специфическая гуморальная защита, первичный иммунный ответ, препятствуют адгезии микробов на слизистых оболочках.

  • Фибриноген – особо ценный показатель гемостаза.

  • Ретинол – транспорт ретинола (витамин А).

  • Тироксин – связывает тироксин и транспортирует его.

  • Транскортин – связывает кортикостерон и кортизол, транспортирует их.

Методы фракционирования

К ним относятся – высаливание, осаждение органическими растворителями, хроматография, электрофорез, тепловая денатурация, кристаллизация, распределение в двухфазных системах и другие методы.

Хроматография

Существует четыре типа хроматографии: распределительная, адсорбционная, хроматография по схожести (аффинная) и ионообменная. Хроматография адсорбционная относится к принципу сорбции – десорбции, когда идет разделение веществ и концентрация их в определенном слое адсорбента. После этого последовательно через колонку пропускают элементы, которые ослабляют адсорбцию, необходимые вещества выносятся с раствором, собираются в коллекторе фракций. Основан метод на способности окрашенных и неокрашенных частиц собираться на адсорбенте, который находится в колонке. Распределительная хроматография – служит опорой для жидкой (стационарной) фазы. Осуществляется на колонках. Ионообменная хроматография используется в фармакологии, клинической биохимии и биотехнологических производствах. Аффинная хроматография помогает выделять вещества высокой степени чистоты.

Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы

Это метод разделения макромолекул, основанный на коэффициенте седиментации. Смесь, которую надо разделить, наносится на поверхность раствора с градиентом концентрации сахарозы, раствор находится в пробирках, в центрифуге, затем пробирки центрифугируются при высоких скоростях вращения. На больших скоростях создается градиент плотности макромолекул вдоль пробирки, в которой одновременно проходит процесс диффузии и седиментации. Фракционирование белков при центрифугировании в градиенте плотности сахарозы основано на различии в скорости осаждения молекул. Скорость седиментации белка зависит от массы молекулы белка, его плотности, размера и формы частицы.

Плазма для фракционирования используется для отделения белка на геле фосфата кальция или гидроксиапатите – это один из видов ионообменной хроматографии. Частицы фосфата кальция или ГА (гидроксиапатита) находятся на инертном носителе, неорганические соли оказывают влияние на прочность связывания положительно заряженных частиц, прочность связывания отрицательно заряженных частиц от неорганических солей практически не зависит. От молекулярной массы белка зависит сорбция в присутствии неорганических солей.

Плазма для фракционирования используется для получения белка на целлюлозе. Проводят фракционирование белка с помощью создания ступенчатой эволюции, так как существует большое различие в способности связываться некоторых белковых фракций к иониту. Белки сыворотки крови, при этих значениях, сорбируются на слабых катионах.

Высаливание

Высаливание белка используют в клинической практике для анализа биологических жидкостей, в том числе анализа белков сыворотки крови. Высаливаются белки сыворотки из растворов, с использованием различной концентрации нейтральных растворов сульфата аммония. Этим методом пользуются для разделения глобулинов и альбуминов. Глобулины выпадают в осадок при насыщении 50%, альбумины при насыщении 100%. На величину высаливания белка влияет валентность ионов, температура, концентрация соли, мера активности ионов водорода в различных растворах, его кислотность.

Электрофорез

Этот метод основан на различии в скорости движения белков в электрическом поле. Скорость белка определяется величиной заряда белка и ионной силы раствора, определенными значениями кислотности - разделяются основные и кислые молекулы белков соответственно их заряду в электрическом поле. Существуют методы зонального электрофореза на твердых поддерживающих средах – целлюлозе, крахмале, полиакриламиде на основе геля.   Эти методы характеризуются тем, что при диффузии или конвекции не происходит размывания границ белок-растворитель, для анализа не требуется большого количества белка, не требуется специальных действий со сложной аппаратурой для определения границ. 






Читаете также

  • 31 мая, 17:10

    Миосаркома

    Миосаркома – злокачественное новообразование, развивающееся из клеток мышечной ткани. Опухоль может развиваться как из гладкой,...

  • 26 февраля, 17:34

    Саркома матки

    Саркома матки относится к так называемым «немым» опухолям, длительное время никак себя не проявляющим. Это...

  • 26 февраля, 17:30

    Саркома кости

    Одним из видов злокачественных новообразований, поражающих кости скелета, является саркома. Это заболевание характеризуется быстрым течением...

Рекомендовано

Клиника факультетской хирургии им. Н.Н. Бурденко

В течение года в отделении проходят обследование и лечение более 1300 человек. Ежегодно сотрудники выполняют свыше 1500 оперативных вмешательств. Профессора,...

Вопросы онкологам

Добренький Алексей Михайлович

Онкогинеколог

Задать вопрос

Личные истории

  • lenlen
    07.12.2016 20:16:46

    Никак не могу справиться

    Привет всем. Неделю почти борюсь с кровью в носу - корочки, слизь, тронешь или сморкаешься - алая кр...

  • 2irina
    07.12.2016 15:36:45

    Результат МРТ

    Отрицательная динамика по количеству и величине мтс в мозге. Сижу в Герцена к Даценко.
    Апд: передел...

  • funky
    07.12.2016 11:18:57

    Очередной поход к врачу

    Сходили к врачу, по поводу мегейса ничего так толком и не ответила, сказала могут сегедрин назначить...

Перейти в блог

Комментарии (0)

Оставить комментарий
Ваш комментарий будет первым.
@Mail.ru .